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        ELISA試劑盒實驗背景深全部呈有色,問題解決方法有了
      2. 發布日期:2020-05-21      瀏覽次數:463
        •    ELISA試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的試驗確診方法。盡管ELISA試劑盒的操作過程看似簡單,但有時還是會出現一些特殊的問題,好比說實驗中背景深全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)
            根據以往技術分析,可能存在的原因有一下幾條:
            1、樣品稀釋液污染
            解決辦法:棄去稀釋液,重新配置;
            2、不正確的孵育時間,溫度(尤其是底物孵育的時間)
            解決辦法:zui為常用的溫育溫度有37℃和室溫,其次是43℃和2~8℃。完全按照說明書要求;
            3、吸頭重復使用,未洗凈或消毒不徹底
            解決辦法:吸頭盡可能一次性使用;
            4、偶聯抗體(streptavidin-HRP)濃度過高
            解決辦法:按照說明書調整到合適的濃度;
            5、ELISA板子不正確的貯存
            解決辦法:酶標板貯存于2-8 ℃;使用結合力低點的Elisa板;
            6、實驗過程中洗滌不充分,洗后未拍干,樣品中其它成分殘留或酶標記物殘留
            解決辦法:洗液準確配制;充分洗滌,靜置15秒,徹底拍干。加樣或加酶拍板的濾紙應棄去不用,不要反復使用,否則易造成污染;
            7、沒有正確封閉
            解決辦法:在標準品稀釋液中加入動物蛋白或延長封閉時間;
            8、底物污染,未避光保存,出現顏色
            解決辦法:棄去底物,重新配置;
            9、樣本溶血嚴重
            解決辦法:建議使用非溶血或輕微溶血樣本,嚴重溶血樣本會導致背景偏高。
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